由于HIV-1基因組成分中60%被去除,因此父代病毒無(wú)法復(fù)制，是目前重組系數(shù)最低的一個(gè)慢病毒包裝系統(tǒng)，至今未見(jiàn)重組報(bào)道。其更安全、更穩(wěn)定、更高效的技術(shù)優(yōu)勢(shì)領(lǐng)先于市場(chǎng)上的三質(zhì)粒及其他包裝系統(tǒng)。綜上特點(diǎn)決定了其應(yīng)用、意義...
1）含有目的基因的慢病毒RNAi干擾載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。2）慢病毒載體，包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞293T等。3）培養(yǎng)48hrs–72hrs左右，收集含有病毒的上清培養(yǎng)液。4）病毒的純化和濃縮。5）分裝、-80...
不會(huì)，除非你轉(zhuǎn)染太多，細(xì)胞死了。為什么慢病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞24小時(shí)后要收集上清離心阿～？因?yàn)槁《究梢员患?xì)胞分泌出胞外，大量存在于血清中。收集上清多方便啊~還有如何流式測(cè)滴度？流式細(xì)胞儀的原理就是將細(xì)胞分群，將感染...
慢病毒包裝簡(jiǎn)要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干擾載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。2）慢病毒載體，包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞293T等。3）培養(yǎng)48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培養(yǎng)液。4）病毒的純化和濃縮。5）分裝、-8...
1.將外源基因插入慢病毒載體2.將構(gòu)建完成的載體與慢病毒包裝質(zhì)?；旌?共轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞3.收集病毒液4.用病毒液感染靶細(xì)胞5.用載體上帶的抗生素進(jìn)行篩選,如果沒(méi)有,可以用無(wú)限稀釋法6.獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)株...
1.將actin基因，放入慢病毒融合表達(dá)載體，與熒光蛋白（GFP）融合表達(dá)，注意避免移碼突變。2.然后將重組質(zhì)粒以及輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，可以用脂質(zhì)體法，慢病毒配套細(xì)胞一般為293。3.收集慢病毒，濃縮。4.用慢病毒轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞。
我們常用的慢病毒載體是以HIV-1(人類(lèi)免疫缺陷I型病毒)為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因治療載體,攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質(zhì)粒、細(xì)胞系的輔助下,經(jīng)過(guò)病毒包裝成為有感染力的病毒顆粒,將其進(jìn)行收集和濃縮...
將重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝質(zhì)粒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染至包裝細(xì)胞中，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，將其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細(xì)胞中測(cè)定病毒滴度。服務(wù)簡(jiǎn)介過(guò)表達(dá)慢病毒服務(wù)過(guò)表達(dá)（cDNA）慢病毒產(chǎn)品服務(wù)是將客戶的...
慢病毒包裝簡(jiǎn)要程序(以六孔板中的1孔為例)：第一天：1.用無(wú)抗生素DMEM+10%FBS鋪板293FT細(xì)胞，2ml/孔。確保第二天細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%融合度第二天：1.轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞。1.500ulOpti-MEM稀釋2ugpWPXLd-目的基因+...
eachtransfection:1μgpLKO.1shRNAplasmid750ngpsPAX2packagingplasmid250ngpMD2.Genvelopeplasmidto20μlserum-freeOPTI-MEMc.(最好在下午或者晚上做)步驟a2h后將慢病毒...
2024/7/26